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我國藥品監管部門對支原體PCR檢測是什么態度?

更新時間:2020-12-08  |  點擊率:810

《中國藥典》2015版《通則3301》規定:

主細胞庫、工作細胞庫、病毒種子批、對照細胞以及

臨床治療用細胞應進行支原體檢查,

方法是同時進行培養法和DNA染色法。

病毒類疫苗的病毒收獲液、原液采用培養法檢査支原體,

也可采用經國家藥品檢定機構認可的其他方法。

 

那么,國家藥品鑒定機構認可哪些其他方法呢?

《中國藥典》2015版沒提到核酸法,

我國藥品監管部門對于核酸法又是抱有什么樣的態度呢?

 

20188月,在《中國藥事》第8期上,

刊登了一篇正式論文——《支原體檢查的核酸檢測方法及方法學驗證的思考》,

 

該文主要針對的是生物制品,也包括細胞治療產品,尤其是CAR-T產品。

該文首先指出了藥典認可的培養法和DNA染色法“具有廣譜性,可以檢出不同生長特性的支原體”,“培養法的靈敏度可達110 CFU支原體,DNA染色法的靈敏度至少為100 CFU支原體”。但這兩種方法有一定局限,

例如:

1. 所需時間較長。培養法需28天,DNA染色法至少也需14天。

2. 對操作人員有一定的技術要求。

3. 均需要用支原體菌株作為陽性對照,而支原體污染后難以去除。

 

基于以上不足,一些新的檢測方法應運而生,例如核酸檢測法。接下來,該文評估了支原體核酸檢測法的研究現狀,其中特別提到:

 

1. “巢式PCR法提高了檢測的特異性及靈敏度,但是,進行兩輪擴增反應無疑增加了試驗操作污染的風險,同時也提高了擴增產物對實驗室環境的威脅。”

 

2. 環介導等溫擴增法(LAMP)“在支原體檢測中往往只用于單一類型支原體檢測”。

 

該文提到,支原體核酸檢測法“具有快速、靈敏、便捷等特點”,但需要開展充分的方法學驗證。如何進行驗證呢?

 

該文提到,歐洲藥典規定,如替代培養基,核酸法的靈敏度需達到10 CFU·mL-1;如替代DNA染色法,核酸法的靈敏度需達到100 CFU·mL-1。日本藥典與歐洲藥典近似。總之,“歐美的態度基本一致,NAT法(筆者注:即核酸法)經過充分驗證后,可能會作為培養法和/DNA染色法的替代方法。”“我國藥典也正在開展支原體NAT法的相關研究工作,并已將增訂支原體NAT法列入工作計劃。”

 

因此,如要替代傳統方法,對NAT法的驗證非常重要,它包括對特異性(Specificity)低檢出限(Detection Limit)和耐用性(Robustness)的驗證。

 

該文指出:“由于國內在用于支原體檢查法參比物質方面的研究工作尚不充分,一定程度上影響了其支原體NAT法方法學驗證研究的速度,而且,我國藥典中

也尚未收錄支原體NAT檢測法的方法學驗證要求”,因此,“針對國內目前這種現狀,有如下幾種解決方案可以考慮”:

 

1. “使用者可以優先考慮那些已按國外法規要求(如EPJP要求)進行過充分方法學驗證、且可以提供驗證報告的檢測方法或商品化試劑盒,但使用者在使用前需按照待測樣本類型進行方法的適用性驗證,并同步開展藥典方法的平行檢測研究,以積累數據為替代藥典方法提供數據支持

 

2.“近兩年國外有些機構已能夠提供可供支原體NAT法方法學驗證的支原體參比物質,并獲得本國藥品監管機構的認可,支原體NAT法的開發者可以考慮引進用于方法學驗證的參比物質樣本”;

 

3. “加快國內支原體檢查法參比物質的研究工作,為國內試劑研究者及使用者提供技術支撐。”

 

可見,我國藥典并非不想采用支原體NAT法,而主要是缺少用于方法學驗證的參比物質樣本,以及驗證學方法需要更多的研究和標準化工作。但支原體NAT法的使用必然是趨勢所向。

 

因此,對于需要NAT法檢查支原體的生物制品和細胞治療產品企業,可選擇試劑盒已經驗證并提供有參比物質的廠家,盡管后續仍需按照待測樣本類型進行方法的適用性驗證,并同步開展藥典方法的平行檢測研究,但已為NAT法檢查支原體帶來極da的方便。

 

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