細胞培養(yǎng)技術(shù),對于實驗環(huán)境的潔凈度有嚴格的要求。不僅要對細胞實驗用的基礎(chǔ)設(shè)施進行維護,還要定期對環(huán)境進行清潔,防止細胞被真菌、細菌、支原體等微生物污染。
我們反復強調(diào)要避免細胞的支原體污染。那么,支原體對于細胞培養(yǎng)而言,究竟有何種危害?本期內(nèi)容,為大家介紹支原體污染的危害。
支原體發(fā)現(xiàn)于1898年。自1956年Robinson從細胞培養(yǎng)物中分離出支原體后, 國內(nèi)外關(guān)于支原體污染細胞的報道便層出不窮。支原體廣泛存在于自然界中, 有80余種。
支原體 (Mycoplamsa) 又稱霉形體,歸屬于柔膜體綱 (Mollicutes) ,共有6個屬,120個種別。支原體沒有細胞壁,不能維持固定的形態(tài)而呈現(xiàn)多形性。
對支原體進行革蘭染色為陰性。不僅如此,支原體對青霉素這類干擾細胞壁合成的抗生素,具有天然抗性。
支原體通常附著在細胞的表面, 并影響其宿主細胞的生理、遺傳等多方面的正常功能, 用這些污染后貌似正常的細胞做試驗或生產(chǎn), 將會嚴重影響結(jié)果。
1、影響細胞的生長繁殖及形態(tài)
細胞培養(yǎng)物遭受到支原體污染后,會出現(xiàn)生長減慢,細胞病變等情況。
具體表現(xiàn)為以下幾點:
不僅如此,某些支原體還可在侵入細胞8小時內(nèi),使線粒體膨脹,繼而被破壞,細胞核呈空泡化,細胞微管解聚,培養(yǎng)瓶中細胞與細胞間隙出現(xiàn)膜狀沉積,細胞無法傳代,甚至整個細胞群體溶解。
2、代謝和功能
支原體污染細胞的情況,在形態(tài)上變化不明顯。但需要注意的是,細胞培養(yǎng)基的pH值,會有比較大的變化。更換培養(yǎng)液后幾小時就變酸,培養(yǎng)基中的必需氨基酸被消耗掉,進而改變細胞代謝。
支原體對細胞代謝和功能的影響,具體體現(xiàn)在以下幾個方面:
有研究表明,在單克隆抗體制備中,骨髓瘤或雜交瘤細胞因支原體的污染而導致融合失敗或抗體分泌能力下降以至喪失。
3
引起染色體異常
改變?nèi)旧w組型,通常可導致細胞染色體斷裂、數(shù)目減少,出現(xiàn)雙著絲點染色體、環(huán)狀染色體等。
4、影響免疫細胞產(chǎn)量
對于巨噬細胞的培養(yǎng)體系,支原體會抑制干擾素的合成和降低其活性,加大了繼發(fā)感染其他細菌和病毒的幾率。也有研究表明,支原體可以通過植物血凝素,干擾淋巴細胞的刺激和分化。
為了盡可能降低細胞污染支原體的風險,應(yīng)定期對實驗環(huán)境進行清潔。
德國MB公司的支原體祛除噴霧劑——Mycoplasma-off™,含有針對支原體的殺除劑Mynox®,可在幾分鐘內(nèi)迅速殺除支原體。
不僅對支原體有效,而且能祛除葡萄球菌、腸球菌、大腸桿菌、奇異變形桿菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、牛腹瀉病毒、腺病毒、多瘤病毒、鼠諾如病毒、牛痘病毒、真菌孢子等微生物。
乙醇作為溶劑,無腐蝕性和致癌性成分。即用型消毒液,可以快速簡單地保持工作區(qū)的清潔干凈。
對于培養(yǎng)箱水槽、水浴鍋這類衛(wèi)生死角,也應(yīng)提高警惕。德國MB公司的水槽支原體預防試劑——Water Shield™,含表面活性劑、季銨鹽和絡(luò)合劑,不易揮發(fā),可持續(xù)作用4周,按1:200比例,直接加入水中,不含醛類或疊氮化物,對細胞無毒害,但能有效預防支原體、細菌、真菌、等微生物污染 。
對于培養(yǎng)箱水槽、水浴鍋這類衛(wèi)生死角,也應(yīng)提高警惕。德國MB公司的水槽支原體預防試劑——Water Shield™,含表面活性劑、季銨鹽和絡(luò)合劑,不易揮發(fā),可持續(xù)作用4周,按1:200比例,直接加入水中,不含醛類或疊氮化物,對細胞無毒害,但能有效預防支原體、細菌、真菌、等微生物污染 。