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如何挑選合適的『支原體檢測』試劑盒?

更新時(shí)間:2023-08-29  |  點(diǎn)擊率:481

細(xì)胞培養(yǎng)過程中,如果發(fā)生支原體污染,很容易影響細(xì)胞的生長、代謝和行為,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)異常。長期存在的支原體污染可能對(duì)細(xì)胞系的健康產(chǎn)生負(fù)面影響,甚至可能改變細(xì)胞系的基因表達(dá)和生物學(xué)特性。

因此,細(xì)胞學(xué)相關(guān)的基礎(chǔ)研究中,需要做好嚴(yán)格地衛(wèi)生清潔工作,預(yù)防支原體污染,并使用方便快捷的方法,監(jiān)測實(shí)驗(yàn)室及實(shí)驗(yàn)品中是否存在支原體污染。

如果需要定期檢測細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室中的培養(yǎng)物,是否存在支原體污染,推薦使用德國Minerva Biolabs公司生產(chǎn)的Venor® Gem Classic支原體常規(guī)PCR檢測試劑盒。

通過擴(kuò)增16S rRNA編碼區(qū)來特異性檢測支原體,而真核生物和其他細(xì)菌DNA(除“檢測特征"部分報(bào)道的DNA外)在Venor®GeM Classic檢測中不擴(kuò)增。

根據(jù)支原體種類的不同,擴(kuò)增子的大小在265-278 bp之間

Venor®GeM Classic常規(guī)PCR檢測試劑盒經(jīng)典法特點(diǎn):

1.內(nèi)控對(duì)照為獨(dú)立包裝,遵循歐洲藥典和日本藥典操作流程。

2.高特異性,僅一條陽性對(duì)照條帶,即可涵蓋所有可能感染細(xì)胞的支原體物種。操作簡單,易于觀察。

3.高靈敏度,若PCR反應(yīng)體系加入10μl樣本,支原體檢測限度為≤5或≤10CFU。

4.歐洲藥典要求的26種支原體均可檢出。該試劑盒可檢測出1種脲原體、7種無膽甾原體和85種支原體,與細(xì)胞和真核DNA無交叉反應(yīng)。

5.試劑盒中不含Taq酶,可另外購買。推薦使用德國MB公司的Taq酶。

通過生物技術(shù)生產(chǎn)的藥物、疫苗和其他治療性產(chǎn)品,其制備過程涉及細(xì)胞培養(yǎng)、發(fā)酵和其他復(fù)雜的生物學(xué)過程。如果該過程存在支原體污染,則可能會(huì)對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量產(chǎn)生嚴(yán)重影響,甚至可能引發(fā)潛在的安全隱患。

各國對(duì)于生物醫(yī)藥制品的生產(chǎn)過程中,支原體的檢測有著嚴(yán)格的要求。《藥典》中規(guī)定“培養(yǎng)法"和“指示細(xì)胞法"是傳統(tǒng)方法,如果用核酸法替代傳統(tǒng)方法,需要經(jīng)過方法學(xué)驗(yàn)證。

因此,在選擇臨床項(xiàng)目申報(bào)所用的支原體檢測試劑盒時(shí),需選擇通過《藥典》方法學(xué)驗(yàn)證的試劑盒。需要兼顧靈敏度和特異性。

在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上,將『針對(duì)支原體特異性保守序列的探針』做熒光標(biāo)記,使PCR擴(kuò)增后的產(chǎn)物帶有熒光,利用熒光信號(hào)的變化和配套軟件,進(jìn)行DNA擴(kuò)增反應(yīng)的實(shí)時(shí)監(jiān)測,簡稱qPCR。

qPCR實(shí)驗(yàn)優(yōu)點(diǎn):

①靈敏度高、特異性強(qiáng)。

②時(shí)間短,2-3小時(shí)出結(jié)果

③檢測結(jié)果可定量

④操作簡便

綜上,支原體qPCR檢測試劑盒比較合適的選擇。

德國MB支原體qPCR檢測試劑盒:

Venor®Gem qEP

產(chǎn)品特點(diǎn):

①經(jīng)典法qPCR試劑盒遵循歐洲藥典流程要求

②高特異性,一次檢測即可涵蓋了所有可能感染細(xì)胞的支原體物種(涵蓋歐洲藥典規(guī)定的9種支原體),根據(jù)序列一致性,至少可以檢測到107種支原體物種。操作簡單,易于觀察。

③高靈敏度,MB公司的支原體qPCR檢測試劑盒經(jīng)典法檢測限可達(dá)到≤10CFU/ml。

④MB公司有相應(yīng)配套的10CFU/100CFU的敏感度測試的標(biāo)準(zhǔn)品,便于方法學(xué)驗(yàn)證。

⑤MB公司有相應(yīng)配套的支原體基因組DNA和細(xì)菌基因組DNA,便于特異性驗(yàn)證。

⑥MB公司有相應(yīng)配套的支原體絕對(duì)定量標(biāo)準(zhǔn)品,便于最后定量檢測。

⑦內(nèi)控對(duì)照為獨(dú)立包裝,遵循歐洲藥典和日本藥典操作流程。