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細胞培養指南,這個關鍵點千萬要注意!

更新時間:2023-10-14  |  點擊率:438

細胞培養實驗是一項基礎但十分重要的技術。幫助科研人員再生物學、醫學和藥物開發等領域,實現探索生物學機理、藥物篩選、開發治療方法等目的,并為基礎科學和臨床應用提供關鍵數據,幫助于我們更深入地了解生命過程,推動醫學和生物科學領域的進步。

 

在細胞培養實驗中,除了可靠的實驗方案、嚴格無菌的環境以及規范合理的實驗操作,還有一個關鍵點,重要但容易被忽視——高品質的實驗試劑。“巧婦難為無米之炊",實驗試劑選擇的好與壞,直接關系到實驗結果的成敗。其中,胎牛血清作為“細胞糧食"的主要提供者,在細胞培養中扮演著重要的角色。

 

胎牛血清提供對維持細胞指數生長的營養物;提供結合蛋白,來識別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結合或調節它們所結合的物質活力;結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合,起到解毒作用;參與細胞貼壁;提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害;參與細胞凍存。

 

因此細胞實驗過程中,需要挑選高品質的胎牛血清,來保障實驗能夠順利進行。在選擇胎牛血清時,有以下幾個注意事項:

 

1、胎牛血清的內毒素含量

在挑選血清時,應關注內毒素含量的高低。內毒素含量高,容易引起細胞衰老、凋亡等情況,品質高的的胎牛血清,內毒素應該是非常低的。因此,內毒素可作為胎牛血清等級評判標準之一,內毒素含量越低的胎牛血清,級別就越高:

內毒素含量≤10EU/ml時,為特級胎牛血清;

內毒素含量﹥10EU/ml≤ 25EU/ml時,為優級胎牛血清;

內毒素含量≥ 25EU/ml時,為標準級胎牛血清。

目前,由于同一廠家,不同批次的血清,內毒素數值也可能有較大差異,因此很多血清廠家在名稱上已不注明級別。但使用者仍可通過檢測報告,自行甄別挑選。

 

2、胎牛血清的血源

澳洲作為無疫產區,環境更為純凈,抗生素等藥物的使用管理也較為嚴格,因此,澳洲血源的胎牛血清,更受科研人員的偏愛。

合格的胎牛血清通常來自符合當地畜牧部門相關規定的的養殖場和屠宰場,采用非侵入性或較小侵入性的采集方法。這樣可以盡可能維持血源的潔凈度,減少外部污染物的影響。

 

3、胎牛血清應通過病原相關檢測

細胞培養的成功與安全性密切相關,而工藝精良的胎牛血清生產技術,可以在生產層面,避免胎牛血清被各類病原微生物污染。在選擇胎牛血清時,科研人員往往無法直接進入生產廠家,了解具體的生產過程,因此,應重點關注檢測報告中的“無菌檢測"、“病毒檢測"“病毒抗體"等相關項目,選擇無病原污染的的胎牛血清。

 

以科研人員常用的,Ausbian進口特級胎牛血清為例。該品牌的胎牛血清為澳洲血源,生產過程經過7次無菌過濾,最后3次為0.1μm濾膜無菌過濾。

為了最終驗證胎牛血清的無菌性,Ausbian進口特級胎牛血清還經過嚴格的病原體檢測,在供應商提供的檢測報告中,涉及有關病毒、細菌、真菌和支原體等,病原體和微生物的篩查檢測項目,檢測結果均為“未檢出",相應病毒的抗體檢測各類蛋白也應呈現“未檢出"的結果,確保胎牛血清的無菌性。另外,Ausbian進口特級胎牛血清的內毒素含量也非常低,控制在3EU/ml以下,有些批次甚至 ≤ 1EU/mL,讓細胞更加健康地生長繁殖。

4、胎牛血清的蛋白含量

總蛋白含量:胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml,數值偏高,可能說明采血的牛齡偏大,不是胎牛;數值偏低,表明血清可能摻入水或者其他溶劑。

血紅蛋白含量:標準為不高于20mg/dl

免疫球蛋白:免疫球蛋白的數值能側面反映出采血的時的牛齡情況,新生牛血清中容易檢出IgMIgG的含量也偏高,胎牛血清,不含IgMIgG的含量也較低。

需要注意的是,在檢測規范允許的范圍內,同一品牌,不同批次的胎牛血清,各類蛋白含量可能略有差異,如果實驗中,對某些蛋白有特殊的需求,需要關注胎牛血清的檢測報告,對不同批次的血清進行選擇。

 

因此盡量選擇能提供多批次平行試用的品牌,經過對比篩選,Ausbian進口特級胎牛血清脫穎而出。同時儲備多個批次,供使用人員試用,選擇更適合自身實驗需求的胎牛血清,試用結果滿意再進行大批量訂購,更加省時省力省心。

 


 

綜上所述,在選擇胎牛血清時,應重點關注胎牛血清的內毒素含量、血源、無菌及病原檢測、蛋白含量等指標,選擇更適合自身細胞實驗的產品。